正式测定前取 2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

生物碱存在于自然界(主要为植物，但有的也存在于动物)中的一类含氮的碱性有机化合物，大多数有复杂的环状结构，氮素多包含在环内，有显著的生物活性，是中草药中重要的有效成分之一。

测定原理：

生物碱与溴甲酚绿指示剂反应，生成绿色化合物，在 416nm处有最大吸收峰。

需自备的仪器和用品：

分光光度计、水浴锅、超声波清洗器、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、80%乙醇、氯仿和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

试剂一：液体 10mL×1瓶，4℃保存；

试剂二：液体 50mL ×1瓶，4℃保存；

试剂三：液体 20mL ×1瓶，4℃避光保存；

生物碱的提取：

样本烘干粉碎，过 80目筛。称取约 0.1g样本，加入 0.1mL试剂一，再加入 0.9,mL80%乙醇，充分混匀后转移到 EP管中，超声波提取 60min， 8000 g，25℃离心 10 min，取上清液待测。另取空 EP管，加入 0.1mL试剂一和 0.9,mL80%乙醇，混匀后作为空白液。

测定步骤：

1、分光光度计预热 30min以上，调节波长至 416nm处。

2、操作表：在 EP管中加入如下试剂

剧烈振荡混匀，室温静置 40min，吸取下层氯仿层 1mL于 1mL玻璃比色皿，416nm处读取吸光值 A，ΔA=A测定-A空白，空白管只要做一管。

生物碱含量计算：

标准条件下测定的回归方程为 y = 3.83x - 0.0005，R² = 0.9942；x为标准品浓度(mg/mL)，y为 ΔA。

生物碱含量(mg/g干重)=(ΔA+0.0005)÷3.83×V样总÷W=0.261×(ΔA+0.0005)÷W

V样总：加入提取液体积，1mL；W：样本鲜重，g。