β-1,3-GA( EC 3.2.1.73)主要存在植物中，催化β-1,3-葡萄糖苷键水解。在植物染病或处于其他逆境条件下，可诱导细胞大量合成β-1,3-GA，因此β-1,3-GA活性测定广泛应用于植物病理和逆境生理研究。β-1,3-GA水解昆布多糖，内切β-1,3-葡萄糖苷键，产生还原末端，通过测定还原糖生成速率，来计算其酶活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

产品组成：

溶液的配制：

1.试剂一：临用前加3.5ml蒸馏水溶解，用不完的试剂4℃保存；

2.标准品：10mg无水葡萄糖，临用前加入1ml蒸馏水溶解，配制成10mg/ml葡萄糖溶液备用，4℃可保存1周。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理(可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献)

1.组织：按照组织质量(g)：提取液体积(ml)为1：5～10的比例(建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液)，进行冰浴匀浆。12000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2.细菌或细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1ml提取液，超声波破菌碎细或细胞(功率20%，超声3s，间隔10s，重复30次)；12000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

二、测定步驟

1.分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。

2.标准品的准备：将标准品用蒸馏水稀释至1、0.8、0.6、0.4、0.2mg/ml。

3.样本测定，(在1.5ml EP管中依次加入下列试剂)

充分混匀，沸水浴5min(盖紧，防止水分散失)，流水冷却，取200μL至微量玻璃比色皿或96孔板中，540nm处记录各管吸光值A，如果吸光值大于2，可以用提取液对样本稀释后测定，ΔA=A测定-A对照。

三、β-1,3-GA活性计算

1.标准曲线的建立：

根据标准管吸光度 x(A标准管-A空白管)和浓度(y，mg/ml)建立标准曲线，将ΔA带入公式中计算出样本中产生的还原糖的含量y值(mg/ml)。

2.β-1,3-GA活性计算：

(1)按蛋白浓度计算单位的定义：每mg组织蛋白每小时产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位。

β-1,3-GA(U/mg prot)=(y×V₁)÷(V₁×Cpr)÷T=y÷Cpr

(2)按样本质量计算单位的定义：每g组织每小时产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位。

β-1,3-GA(U/g质量)=(y×V₁)÷(W×V₁÷V₂)÷T=y÷W

(3)按细菌或细胞数量计算单位的定义：每1万个细胞或细菌每小时产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位。

β-1,3-GA(U/10⁴cell)=(y×V₁)÷(500×V₁÷V₂)÷T=0.002×y

V1：加入反应体系中样本体积，0.035ml；V2：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；T：反应时间，60min=1h；500：细菌或细胞总数，500万。