β-GC(EC 3.2.1.21)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化β-糖苷键水解，具有多方面生理作用：在纤维素的糖化作用中，β-GC负责进一步水解纤维素二糖和纤维素寡糖生成葡萄糖；β-GC水解萜烯类香气前驱体，使糖苷键合态变成游离态。从而产生香味；β-GC能够水解植物体内野黑樱苷，释放HCN，从而防止昆虫取食。

β-GC分解对-硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算β-GC活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

产品组成：

溶液的配制：

试剂一：临用前每瓶加入10ml双蒸水，充分溶解备用；用不完的试剂仍-20℃保存；

标准品：5μmol/ml的对硝基苯酚溶液。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1ml玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水

操作步骤：

一、样本处理(可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献)

1.细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量(104个)：提取液体积(ml)为500～1000：1的比例(建议1000万细菌或细胞加入1ml提取液)，超声波破碎细菌或细胞(冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次)；15000g 4℃离心20min，取上清，置冰上待测。

2.组织：按照组织质量(g)：提取液体积(ml)为1：5～10的比例(建议称取约0.2g组织，加入1ml提取液)，进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心20min，取上清，置冰上待测。

二、测定步驟

1.分光光度计预热30min以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。

2.标准样本的准备：取100μL标准液，加入到400μL试剂三中，得到1μmol/ml标准液，十倍稀释到100nmol/ml，用蒸馏水倍比稀释：50、25、12.5、6.25nmol/ml。100、50、25、12.5、6.25、0nmol/ml做标准液。

3.加样表：

三、β- GC活力单位的计算

1.标准曲线建立：根据标准管的浓度(x)和吸光度(减去浓度为0标准管的OD值，y)，建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA

(y)带入公式计算样本产物浓度x(nmol/ml)。

2.按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg组织蛋白每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

β-GC活力(U/mg prot)=(x×V反总)÷(V样×Cpr)÷T=20x÷Cpr

蛋白浓度需要另外测定。

3.按样本质量计算：

单位的定义：每g组织在每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

β-GC活力(U/g质量) = (x×V反总)÷(W×V样÷V样总)÷T=20x÷W

4.按细菌或细胞数量计算：

单位的定义：每1万个细菌或细胞每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

β-GC活力(U/10⁴cell)=(x×V反总)÷(1000×V样÷V样总)÷T=0.02x Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；V反总：反应体系总体积，1ml；V样：加入反应体系中样本体积，0.1ml；V样总：加入提取液体积，1ml；W：样本质量，g；1000：细胞或细菌总数，1000万；T：反应时间，0.5h。