测定原理: SDH催化山梨醇脱氢生成果糖,同时还原NAD+生成NADH,测定340nm吸光度增加速率可以计算SDH活性。仪器设备: 可调式移液器、水浴锅、台式离心机、紫外分光光度计、石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。试剂组成:(50T/48 样)提取液:液体60ml×1 瓶,4°C保存;试剂一:液体20ml×1 瓶,4°C保存;试剂二:粉剂×1 瓶,4°C保存;临用前每瓶加入15ml蒸馏水,用不完的试剂仍4°C保存。试剂三:粉剂×1 瓶,-20°C保存;临用前每瓶加入15ml蒸馏水,用不完的试剂仍-20°C保存。操作步骤:1、粗酶液提取:粗酶液提取详见试剂盒内说明书。测定细菌、组织和细胞时需要测定蛋白浓度。2、操作表:
混匀,37°C(哺乳动物)或25°C(其它物种)准确水浴5min
将上述试剂按顺序加入1ml石英比色皿中,加样本同时计时,记录20秒时的初始吸光度A1和2分钟20秒时的吸光度A2,计算△A=A2-A1。