正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

蔗糖是植物光合作用的主要产物，也是糖分运输和储藏的主要形式。因此，测定蔗糖含量对于植物糖代谢具有重要意义。此外，蔗糖含量是饮料﹑蜂蜜、果脯﹑糖果和乳制品等产品质量控制的重要指标之一。

测定原理：

先用碱与样品共热，破坏其中的还原糖。然后在酸性条件下将蔗糖水解生成葡萄糖和果糖，果糖进一步与间苯二酚反应，生成有色物质，在 480nm下有特征吸收峰。

所需的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

提取液：液体 100ml×1瓶，4℃保存；

试剂一：液体 10ml×1瓶，4℃保存；

试剂二：液体 2ml×1瓶，4℃保存；

试剂三：液体 20ml×1瓶，4℃保存；

试剂四：液体 6ml×1瓶，4℃保存；

试剂五：粉剂 0.5g×1瓶，常温保存。

蔗糖提取：

称取 0.1～0.2g样本，常温研碎，加入 0.5ml提取液，适当研磨后快速转移到离心管中，置于 80℃水浴锅中 10min，振荡 3～5次，冷却后，4000g，常温离心 10min，取上清，加入 2mg试剂五，80℃脱色 30min，再加入 0.5ml提取液，冷却后，4000g，常温离心 10min，取上清液测定。

测定步骤：

1、分光光度计或酶标仪预热 30min以上，调节波长至 480nm，蒸馏水调零。

2、样本测定，(在 EP管中依次加入下列试剂)：

混匀，沸水浴煮沸 5min左右(盖紧，防止水分散失)

混匀，沸水浴 30min，冷却后取 200μL至微量石英比色皿或 96孔板中测定 480nm处光吸收值，空白管、标准管和测定管分别记为 A₁、A₂和 A₃。空白管和标准管只要做一管。

蔗糖含量计算：

1、按照蛋白质含量计算

蔗糖含量(mg/mg  prot)=(C标准管×V₁)×(A₃-A₁)÷(A₂-A₁)÷(V₁×Cpr)=(A₃-A₁)÷(A₂-A₁)÷Cpr

此法需要自行测定蛋白浓度。

2、按照样品质量计算

蔗糖含量(mg/g鲜重)=(C标准管×V₁)×(A₃-A₁)÷(A₂-A₁)÷(W×V₁÷V₂)=(A₃-A₁)÷(A₂-A₁)÷W。

C标准管：标准管浓度，1mg/ml；V₁：加入样本体积，0.025ml；V₂：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本鲜重，g。

注意：最低检测限为 100ng/g 鲜重或 1ng/mg prot